Preparació de mostres:
Recollida de mostres: recopileu mostres com la sang, el teixit, la saliva i l’orina segons el propòsit de l’experiment.
Extracció d'ADN: utilitzeu un kit dedicat a l'extracció d'ADN per extreure l'ADN de la mostra.
Preparació de la reacció PCR:
Primers de disseny: Disseny parells d’imprimació específics basats en la seqüència de destinació per a l’amplificació de l’ADN de la plantilla.
Prepareu la barreja de reacció: incloent ADN de plantilla, imprimadors, tampó, ADN polimerasa, DNTPS (desoxinucleosida trifosfats), mg 2+, etc.
Estableix el programa PCR:
Configuració de l’instrument PCR: Introduïu els paràmetres del cicle PCR preestablert, com ara la temperatura de preescalfament de 95 graus, la temperatura de desnaturalització (com ara 95 graus), la temperatura de recuit (com ara 55 graus), temperatura d’extensió (com ara 72 graus) i nombre de cicles.
Reacció PCR:
Afegiu mostra: afegiu la barreja de reacció al dipòsit o xip de reacció PCR, i cada mostra sol tenir una reacció.
Realitzeu PCR: Els instruments PCR ciclen segons el programa preestablert, incloent escalfament, refrigeració, recobriment i passos d'extensió.
Anàlisi del producte:
Refredament després de l'amplificació: un cop finalitzada la PCR, la mostra es refreda breument a 4 graus.
Separació electroforètica: utilitzeu la tecnologia d’electroforesi en gel, com ara l’electroforesi en gel d’agarosa, per separar productes de PCR de diferents longituds.
Escaneig de fluorescència: els primers marcats amb marcació fluorescentment emeten una longitud d’ona específica en el producte amplificat, i l’instrument PCR llegeix aquests senyals i els registra.
Processament i interpretació de dades:
Programari d’anàlisi de dades: utilitzeu programari especialitzat per analitzar el senyal fluorescent i calcular la concentració o concentració relativa del fragment objectiu.
Interpretació del resultat: Basat en la corba de PCR i la línia de base, determineu si la PCR té èxit, si existeix el fragment objectiu i quant és.
Enregistrament i conservació de resultats:
Registra els resultats de l’informe experimental i conserva adequadament les dades i mostres originals.